Калькулятор температуры плавления праймера ПЦР
Рассчитайте температуру плавления (Tm) праймера ПЦР по правилу Уоллеса: Tm = 2(A+T) + 4(G+C).
Как использовать калькулятор Tm праймера ПЦР
- Подсчитайте каждый нуклеотид в последовательности праймера.
- Введите количество оснований аденина (A).
- Введите количество оснований тимина (T).
- Введите количество оснований гуанина (G).
- Введите количество оснований цитозина (C).
- Нажмите «Рассчитать», чтобы увидеть Tm, содержание GC и длину праймера.
Примеры использования
- •Дизайн праймеров ПЦР для клонирования и экспрессии генов.
- •Оптимизация температуры отжига для протоколов ПЦР.
- •Сравнение пар праймеров на схожесть значений Tm в мультиплексной ПЦР.
Формула
Правило Уоллеса: Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C). Действительно для праймеров до ~20 п.н. Для более длинных праймеров используйте метод ближайших соседей.
Часто задаваемые вопросы
Что такое Tm праймера?
Температура плавления (Tm) — это температура, при которой 50% праймера отожжено на своей комплементарной последовательности. Используется для выбора температуры отжига ПЦР, обычно на 5°C ниже Tm.
Когда следует использовать правило Уоллеса?
Правило Уоллеса точно для коротких олигонуклеотидов (< 20 п.н.) в стандартных условиях соли. Для более длинных или сложных праймеров используйте термодинамические расчёты ближайших соседей.
Отказ от ответственности
Только для образовательных и исследовательских целей. Фактические значения Tm варьируются в зависимости от концентрации соли, концентрации праймера и вторичной структуры. Рекомендуется экспериментальная проверка.